一个试剂盒能同时有效检测CAR-T细胞输注后24种因子
发布日期：2020年12月11日
细胞因子释放综合征（CRS）是嵌合抗原受体-T细胞（CAR-T）治疗的严重副作用之一。有效的细胞因子监测可以为早期预防和治疗提供支持。随着越来越多有前景的标志物被发现与CRS反应相关，传统的ELISA方法因其样品消耗量大、灵活性低、难以同时检测多种细胞因子而不适用。
如何一次检测多种细胞因子从而提高效率降低成本？如何准确、有效地检测患者CAR-T细胞输注后的CRS，“捍卫”患者的安全？本次2020ASH大会入选了燕达陆道培医院的流式细胞仪Aimplex试剂盒检测24种细胞因子的研究报道，并且该研究显示此试剂盒是检测CAR-T细胞输注后CRS的有效方法。医学界血液频道诚邀报告者王东出医生详解此项研究成果的诞生之路与临床意义。CAR-T细胞回输后检测患者体内的细胞因子，传统方法一直是ELISA方法，而随着越来越多CRS相关的细胞因子被报道出来，而传统方法一次只能检测一种细胞因子，重复操作工作量大且标本消耗量也较大，难以满足现有的临床需求。“因此，我们将传统方法改为现在的流式细胞技术与微球相结合的方法来检测临床送检的标本；我们尝试着用新的高通量的平台，就是本次Aimplex试剂盒所基于的流式细胞术与微球相结合的平台。”王东出医生谈到。有了基础技术的支持，新的问题又诞生了。“新的基于流式细胞与微球相结合的检测方法是否能完美替代传统ELISA方法，也就是我们本次研究所探究的重点问题。”王东出医生补充道。本研究采用双管平板法检测24种细胞因子，包括IFN-γ/IL-1β/IL-2/IL-4/IL-5/IL-6/IL-8/IL-10/IL-12p70/IL-17A/IL-17F/IL-22/TNF-α/TNF-β和sCD25/GM-CSF/IL-15/MCP-1/GranzymeB/Reg3A/ST2/TNFRSF1A/Elafin/MIP-1α，并选取50例未经CAR-T治疗的完全缓解（CR）患者作为正常对照，建立24种细胞因子的正常值。选择2020年1月至6月河北燕达陆道培医院输注CAR-T细胞的81例患者。分别于输注后0d、4d、7d、11d、15d、20d和30d采集血清，FCM-Aimplex检测24种细胞因子。其中31例患者通过检测IL-6、IFN-γ、TNF-α和sCD25四种常规细胞因子进行FCM和ELISA方法学比较。根据临床表现将66例患者分为2组，60例无CRS或轻度CRS患者被分为低等级CRS组，6例2级或3级CRS患者被分为高等级CRS组。研究结果显示：ELISA与Aimplex试剂盒检测结果具有良好的相关性，CAR-T治疗后PBs细胞因子时间变化曲线相似。高CRS分级组IL-2、IL-10、IL-12p70、IL-17A、IL-17F、MCP-1、ST-2s、IL-5、IL-6和IFN-γ浓度明显高于对照组。通过比较pbCD3+细胞中CAR-T+、CD8+和CD4+T细胞的比例及细胞因子浓度，发现PB标本中CAR-T+、CD8+T细胞百分率与大多数细胞因子呈显著正相关，CD4+T细胞比例与大多数细胞因子呈负相关。“我们首先对ELISA方法与Aimplex试剂盒做了一个方法学的对比，最直观的结果可以看到这两种方法所检测的结果不管在高值区域还是低值区域，趋势都是一致的。”王东出医生谈到。任何一项新型技术只有回归临床才能发挥它最大的价值与意义，在谈到该技术有何临床实践意义时，王东出医生说：“首先该技术能够定量地去检测样本中的24种细胞因子，检测结果可以直观地展现患者CRS的病因或是明确患者体内的微环境。”该技术还可以指导临床用药，只有明确病因以及严重程度才能更好地选择用量以及用药时机。基于该技术覆盖的多种细胞因子，在临床选择靶向药时可以更加精准。除外数据化地检测患者体内细胞因子的变化，检测结果也能够直观地反映出靶向药物的疗效如何。甚至基于该检测结果的大数据分析患者回输CAR-T细胞前后的细胞因子曲线，能够在CRS反应之前就提前做出反应，观测特定细胞因子的升高来预测整个病程的发展，提前预防CRS的发生。Aimplex试剂盒除了为后期创建大样本数据库，助力未来更多研究之外，还有以下亮点和优点。新Aimplex试剂盒标本用量只需要22.5~45微升就能把所需要的细胞因子都检测出来，而传统的ELISA方法检测一种细胞因子就需要50-200微升。“当标本是血清时，该优点可能不会那么突显；但当患者接受CAR-T细胞输注后发生中枢神经反应，临床医生就需要检测脑脊液中的细胞因子，当所需细胞因子数目相同时，ELISA方法所需的标本量就会远远大于Aimplex试剂盒。”“Aimplex试剂盒是基于流式细胞平台，而流式细胞仪在各个医院都非常常见。因此从转换成本以及可以性上来看都相当具有优势。”王东出医生说道。CAR-T细胞治疗输注后
不良反应监测系统如何完善？
“首先我认为，目前CRS反应的评判标准实际上是存在差异的；目前一些评判标准都是基于一些临床反应，比如发热、器官损伤、血氧浓度或是肌酐，因此细胞因子的定量检测是非常重要的。”王东出医生谈到。其次，临床医生还应该保持这样的疑问：CRS真的是因为CAR-T细胞回输而引起的吗？《新英格兰杂志》上发表过一篇研究报道，提出CRS可以因为CAR-T细胞回输而引起，也可能由于自身免疫性疾病比如免疫系统过度活化而引发。“因此，如果想要系统全面地监测患者CAR-T细胞回输后的相关反应，检验科室与临床科室之间的信息传递其实是非常重要的，只有排除了一些混淆因素的干扰，才能更加精准地去判断患者的病情情况。”CAR-T细胞治疗确实给一部分患者带去了治愈的希望，但除了疗效，如何正确管理不良反应，甚至预测、预防不良反应的发生，这些都是临床医生亟待思考的问题。希望本次2020 ASH的报道能够给予临床医生以更多启示。（来源：中国血液学会，医学界血液频道 ，作者uu）
